梅奥诊所研究人员发现，多发性骨髓瘤新药LCL161可刺激人体免疫系统，导致多发性骨髓瘤患者的肿瘤缩小。这些研究结果发表在《自然·医学》杂志上。  多发性骨髓瘤是一种血液癌，它能影响血液的白细胞和血浆细胞，正常情况下两种细胞都能产生抗体，可以抵抗感染。癌细胞在生长时不会产生有用的抗体，而是分泌大量单一抗体，积累在体内导致肾脏病变和感染。  在这项研究中，研究25位多发性骨髓瘤患者的主要研究员，同时也是梅奥诊所生物化学家的玛尔塔•凯西博士说：“LCL161药物最初被开发是用于促进肿瘤死亡。然而，我们发现药物不能直接杀死肿瘤细胞，而是使免疫系统更加突出，然后免疫系统将肿瘤细胞识别为外来入侵者并消除它们。梅奥诊所的研究人员将结合免疫检测点抑制剂对LCL161药物进行后续临床试验，已经广泛地应用于许多肿瘤治疗中，用来评估LCL161是否能代替新治疗选择。  凯西博士说:“临床前的研究模型是在十年前发展起来的，主要是为了精确地预测哪一种药物能够应用到临床治疗，而且还能帮助多发性骨髓瘤患者考虑哪些实验治疗剂是最好的。这项研究强调了研究药物对在培养板上的肿瘤细胞的影响重要性，而且还研究了肿瘤细胞与自身微环境的相互作用的重要性，研究发现表明LCL161药物对多发性骨髓有活性抑制，而且类似的药物比之前的药物可能具有更广泛的临床活性。
LCL161的生物活性      体外      LCL161 以剂量依赖性方式显示Hep3B（IC 50 =10.23μM）和PLC5（IC 50 =19.19μM）细胞中的抗增殖作用并显着降低细胞活力。LCL161以剂量依赖性方式在两种敏感细胞系中显着诱导凋亡。从非常低的浓度开始，LCL161显着下调cIAP1的表达。低浓度的LCL161在浓度为0.5 nM时开始抑制cIAP1 [2]。LCL161是一种小分子口服IAP拮抗剂，用于与细胞毒性剂联合使用。在体外研究了LCL161对CYP3A4 / 5（CYP3A）活性的影响。人肝微粒体的结果表明，LCL161以浓度和时间依赖性方式抑制CYP3A（K I为0.797μM，K inact为0.0803min -1）。LCL161在报告基因测定中激活人PXR并在人肝细胞中诱导CYP3A4 mRNA高达~5倍。      在体内      携带肿瘤的小鼠用载体或LCL161 po以50mg / kg /天的剂量或SC-2001 po以10mg / kg /天的剂量，每周5天，或组合持续治疗，持续时间为50mg / kg /天。研究。通过与SC2001和LCL161共同处理显着抑制肿瘤生长，并且在研究结束时，共处理组中的肿瘤大小仅为对照组的三分之一。LCL161是一流的口服Smac模拟物，显示在小鼠异种移植模型中诱导cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的裂解      LCL161的实验参考方法      激酶测定      使用探针反应，咪达唑仑-1'-羟基化和睾酮6β-羟基化来评估CYP3A活性。对于可逆抑制，孵育（37°C，10分钟）由（最终浓度）组成：磷酸钾缓冲液（100 mM，pH 7.4），β-NADPH（1 mM），氯化镁（5 mM），微粒体蛋白（ 0.025 mg / mL），探针底物（1μM咪达唑仑或25μM睾酮），LCL161（0,0.5,1,5,10,25,50或100μM）和有机溶剂（0.2％乙腈用于咪达唑仑，0.2％甲醇用于睾酮）。预孵育3分钟后，通过加入β-NADPH引发反应，并通过加入乙腈（两个体积）终止反应。先前显示反应与时间和蛋白质浓度呈线性关系（结果未显示），咪达唑仑和睾酮转换分别为8.7±1.3％（n = 3）和2.6±0.20％      MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。      细胞分析      将细胞（3×10 4活细胞/孔）铺板于96孔透明底白板中，并将板在37（5％CO 2）下孵育~24小时。/ 95％空气）在加湿培养箱中。然后用各种浓度（0.5,1,2.5,5,10,25或50μM）的LCL161，阳性对照，利福平（RIF）或媒介物对照（0.1％DMSO）处理细胞（6个重复孔）。 Puracyp剂量培养基中24小时的最终浓度。孵育期后，用PBS洗涤细胞，裂解并根据供应商的说明添加荧光素酶底物。将每个孔的等分试样转移到黑色96孔板的相同孔中。用TopCount NXT微孔板闪烁和发光计数器测量每个孔的发光。细胞活力是通过使用CellTiter-GLO细胞的ATP含量测量经过相同处理的PXR -报道基因测定板分离板测量?发光细胞活力检测试剂盒。所有治疗的细胞活力> 80％      MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。      动物管理局      小鼠使用      雄性NCr无胸腺裸鼠（5-7周龄）。将每只小鼠皮下接种于背侧，将1×10 6个 Huh-7细胞悬浮于0.1mL含有50％基质胶的无血清培养基中。当肿瘤达到200-300mm 3时，小鼠每天一次接受LCL161（50mg / kg）或SC-2001（10mg / kg）po，或LCL161和SC-2001的组合。控制接收车辆。使用卡尺每周测量肿瘤，并使用以下标准公式计算它们的体积：宽度2 ×长度×0.52。LCL161是一流的口服Smac模拟物，显示在小鼠异种移植模型中诱导cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的切割。      大鼠      LCL161口服给药，每周一次，每次21天，起始剂量为10mg（通过使用在10％大鼠中引起严重毒性的十分之一剂量并转化为人等效剂量计算）。在MDA-MB-231三阴性乳腺癌异种移植模型中，每周一次和每日两次LCL161给药同样有效。每周一次耐受性更好，体重减轻。